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手把手教你看高分辨質(zhì)譜的色譜質(zhì)譜圖

更新時(shí)間:2023-03-30 點(diǎn)擊次數(shù):2999

分辨率是指質(zhì)譜儀區(qū)分兩個(gè)質(zhì)量相近(質(zhì)量差為Δm)的離子的能力。分辨率主要有10%峰谷比和半高峰寬兩種計(jì)算方式。

10%峰谷計(jì)算方式如下圖(圖來(lái)源網(wǎng)絡(luò)):


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半峰高比計(jì)算方式如下圖(圖來(lái)源網(wǎng)絡(luò)):

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現(xiàn)在我們邊看圖邊了解一些術(shù)語(yǔ)吧。

質(zhì)荷比(mass charge ratio):離子的質(zhì)量與它所帶電荷的比值, 叫作質(zhì)荷比,簡(jiǎn)寫(xiě)為m/z。比如脂質(zhì)CL 72:7|CL 18:1_18:2_18:2_18:2,分子式為C81H144O17P2,其帶一個(gè)電荷時(shí)[M-H]-質(zhì)核比為1449.9818,而帶兩個(gè)電荷時(shí)[M-2H]2-質(zhì)核比為724.4877,如下圖。

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離子豐度(Abundance of ions):檢測(cè)器檢測(cè)到的離子信號(hào)強(qiáng)度。

離子相對(duì)豐度(Relative abundance of ions):以質(zhì)譜圖中zhi定質(zhì)荷比范圍內(nèi)zui強(qiáng)峰為100%, 其它離子峰對(duì)其歸一化所得的強(qiáng)度。

基峰(Base peak):在質(zhì)譜圖中,zhi定質(zhì)荷比范圍內(nèi)強(qiáng)度最大的離子峰叫作基峰。基峰的相對(duì)豐度為100%。

總離子流圖(Total ions current,TIC):在選定的質(zhì)量范圍內(nèi),所有離子強(qiáng)度的總和對(duì)時(shí)間或掃描次數(shù)所作的圖。

提取離子色譜圖(Extracted ion chromatogram,EIC):全掃描質(zhì)譜中提取的某個(gè)特定質(zhì)荷比的色譜圖。

質(zhì)量色譜圖(Mass chromatograph):zhi定某一質(zhì)荷比的離子強(qiáng)度對(duì)時(shí)間或掃描號(hào)所作的圖,也是我們通常所說(shuō)的質(zhì)譜圖。

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接下來(lái)我們來(lái)通過(guò)實(shí)例來(lái)看高分辨質(zhì)譜的強(qiáng)大用處吧。以谷氨酰胺-13C5-15N2培養(yǎng)細(xì)胞,實(shí)測(cè)細(xì)胞中谷氨酰胺的代謝物谷氨酸為例。谷氨酸分子式為C5H9NO4,平均分子量為147.1293,單同位素分子量為147.05316,理論計(jì)算[M+H]+質(zhì)核比(m/z)為148.0604343。圖中上圖為谷氨酸提取離子色譜圖(保留時(shí)間8.79min),下圖中為谷氨酸的質(zhì)譜圖。色譜圖中只能看到一個(gè)峰,而質(zhì)譜圖顯示出8.79min處的色譜圖包含多個(gè)谷氨酸同位素標(biāo)記物(見(jiàn)圖標(biāo)記)。從圖中我們可以知道僅用色譜我們是不能判斷出谷氨酸具有多種同位素標(biāo)記。

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下圖為高分辨質(zhì)譜(分辨率70000)測(cè)得的谷氨酸-13C3質(zhì)譜圖([M+H]+理論值為151.0705,實(shí)測(cè)值151.0704,誤差為0.66ppm)和谷氨酸13C2-15N1質(zhì)譜圖([M+H]+理論值為151.0642, 實(shí)測(cè)值151.0643,誤差為0.66ppm)。如果我們使用的是低分辨率的質(zhì)譜,我們觀(guān)察到的僅是m/z為151.07的一個(gè)峰,而不能觀(guān)察到不同同位素標(biāo)記的兩個(gè)峰。

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高分辨質(zhì)譜圖還能查看特定質(zhì)核比的二級(jí)質(zhì)譜圖,通過(guò)二級(jí)譜圖我門(mén)可以很快對(duì)化合物進(jìn)行定性。以2-羥基丁酸和3-羥基丁酸在HILIC條件下測(cè)試為例,可以通過(guò)m/z=103.0405的二級(jí)譜圖判斷,2-羥基丁酸具有特征離子57.0347,而3-羥基丁酸具有特征離子59.0139,從而快速判斷出2.41min為2-羥基丁酸,3.42min為3-羥基丁酸。

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